一、本研究所屬科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域?yàn)閼?yīng)用基礎(chǔ)研究。二、項(xiàng)目主要內(nèi)容目的：觀察99Tc-亞甲基二磷酸鹽（99Tc-MDP）對體外培養(yǎng)的人眼球后成纖維細(xì)胞（retroocular fibroblasts，RFs）的增殖、γ-干擾素刺激后RFs表達(dá)細(xì)胞粘附分子-1（Intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、人類白細(xì)胞抗原（Human leucoctye antigen，HLA）-DR（HLA-DR）、CD40以及透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、I型膠原蛋白合成的影響。方法：1. RFs的培養(yǎng)與鑒定。眼球后結(jié)締組織分別取自GO患者和正常人，取材后立即送實(shí)驗(yàn)室并無菌條件下對組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞在2～8代間。采用倒置相差顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)染色對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。2. RFs分別與外源性細(xì)胞因子——TNF-α（100U/mL）以及不同濃度的99Tc-亞甲基二磷酸鹽（0–1000 mg/L）共同孵育48小時(shí)后，3H-TdR摻入法檢測TNF-α對RFs增殖的影響，放射性免疫法檢測TNF-α對透明質(zhì)酸合成的影響，以及99Tc-MDP干預(yù)后RFs增殖和透明質(zhì)酸合成的情況。3. RFs分別與IFN-γ（100U/mL）、IL-1（100U/mL）以及不同濃度的99Tc-MDP（0–10μg/L）共同孵育48小時(shí)后，流式細(xì)胞儀檢測IFN-γ、IL-1對RFs 表達(dá)ICAM-1、HLA-DR狀況的影響，以及99Tc-MDP干預(yù)后的表達(dá)情況。結(jié)果：1. 培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)上呈成纖維原細(xì)胞型，且表達(dá)纖維原細(xì)胞的標(biāo)記波形蛋白，同時(shí)不表達(dá)細(xì)胞角蛋白，提示培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)為純凈的纖維原細(xì)胞。2. 外源性細(xì)胞因子TNF-α刺激后，能夠顯著刺激RFs的增殖和透明質(zhì)酸的合成、分泌，而99Tc-亞甲基二磷酸鹽干預(yù)后，透明質(zhì)酸和膠原蛋白的分泌合成受到明顯的抑制。3. IFN-γ、IL-1能顯著誘導(dǎo)RFs過度表達(dá)ICAM-1、HLA-DR等免疫調(diào)節(jié)因子（P<0.01）。99Tc-亞甲基二磷酸鹽干預(yù)后，ICAM-1、HLA-DR的過度表達(dá)均受到明顯的抑制。結(jié)論99Tc-MDP能夠以劑量依賴的方式抑制體外培養(yǎng)的人RFs的增生。三、項(xiàng)目應(yīng)用范圍及推廣情況：Graves眼病是內(nèi)分泌科常見疾病之一，由于其確切的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，其治療較為困難。臨床研究表明99Tc -MDP具有改善、緩解GO患者臨床癥狀的治療作用，但其治療作用機(jī)理不明。本研究結(jié)果驗(yàn)證了99Tc -MDP有減少GO的免疫損傷的作用，并部分闡明了99Tc -MDP的治療機(jī)理，為臨床推廣應(yīng)用99Tc -MDP治療GO提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，意義十分重大。目前已經(jīng)在河南中醫(yī)學(xué)院一附院等多家醫(yī)院進(jìn)行推廣應(yīng)用，臨床療效確切。